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          TWIST建庫(104206/07)

          品牌:TWIST

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          商品描述

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          增強型酶切片段化

          Twist 文庫制備酶切片段化 (EF) 試劑盒 2.0 旨在幫助您更高效地開展測序流程,獲得更準確的新一代測序 (NGS) 結果。與原 Twist 文庫制備 EF 試劑盒 1.0 相比,此次更新的試劑盒具有多種優勢。除新的片段化和連接模塊外,升級后的試劑盒現在還包括 Equinox 文庫制備擴增預混液。這種熱啟動酶制劑在低輸入體積下錯誤率更低*,且效率更高,因此非常適合 FFPE 等需要高效率和高產量的樣本。

          該試劑盒簡化的工作流程將文庫制備步驟合并為一個單管反應,再加上低嵌合體率和 Twist 高度均一的靶向富集工作流程,確保您實現更高質量的文庫制備,獲得更可靠的測序結果。

          文庫制備工作流程

          Twist 文庫制備 EF 試劑盒 2.0 包含進行末端修復、dA 加尾、接頭連接和文庫擴增所需的試劑。試劑盒還包含 gDNA 樣本片段化所需的酶,可以用于調節插入片段大小。構建核心文庫之后,可使用全長或通用接頭來滿足您的應用需求。

          主要優勢

          簡化您的工作流程

          ? DNA 樣本起始量靈活:1 ng– 500 ng

          ? 3 小時即可將 DNA 樣本轉化為穩定的擴增文庫

          ? 單管式文庫制備操作,提高效率,獲得一致結果


          穩定、高產量擴增

          ? 熱啟動酶制劑,在樣本起始量較低時實現高效產出

          ? 文庫制備過程中 GC 含量耐受性范圍高 (20%–80%)

          ? 與常用的聚合酶相比,錯誤率更低


          高均一性,低嵌合率

          ? 搭配 Twist 靶向富集工作流程,實現高度均一的擴增

          ? 更可靠地檢測實際存在的嵌合體

          ? 能從高度復雜的文庫中獲得一致的產出,具有良好的靈敏度和特異性































          保持中靶率

          Twist 文庫制備 EF 試劑盒 2.0 的中靶率與 Twist 文庫制備 EF 試劑盒 1.0 的中靶率相當。這里比較了不同雜交條件下的中靶片段比例。

          靶向富集使用 Twist 核心外顯子組組合和 Twist 通用接頭系統進行。測序使用 NextSeq? 550 或 2000 平臺完成。將數據降至 150x 的靶向覆蓋深度,并使用 Picard Metrics 進行分析。誤差線表示重復樣本間的標準差。


          降低嵌合率,減少測序錯誤

          在文庫制備過程中,盡可能減少不合適的 DNA 連接或重組可以將嵌合體導致的測序錯誤降至最低。如圖所示,與 Twist 文庫制備 EF 試劑盒 1.0 相比,升級版 Twist 文庫制備 EF 試劑盒 2.0 可顯著降低嵌合測序片段比例。且其文庫制備的嵌合率與機械片段化相近。

          NGS 文庫通過 Twist 酶切片段化文庫制備試劑盒 1.0、Twist 酶切片段化文庫制備試劑盒 2.0 或 Twist 機械片段化文庫制備試劑盒生成。靶向富集使用 Twist 核心外顯子組組合和 Twist 通用接頭系統進行。使用 NextSeq? 2000 平臺完成測序。將數據降至 150x 的靶向覆蓋深度,并展示 Picard Metrics PCT_CHIMERAS 數據。誤差線表示重復樣本間的標準差。


          始終如一的性能

          可重復的性能確保了結果的可靠性。當實驗條件保持不變時,Twist 文庫制備 EF 試劑盒 2.0 可產生穩定、一致的 DNA 文庫片段大小。如圖所示為使用此試劑盒生成的 8 個不同 NGS 文庫的電泳圖。熒光曲線的重疊顯示文庫制備具有一致性,可以在運行之間實現。

          NGS 文庫使用 Twist 文庫制備 EF 試劑盒 2.0 和 Twist 通用接頭系統制備而成。在 37°C 下,對 50 ng 高質量 gDNA 進行片段化處理,持續 20 分鐘,再進行 6 個PCR循環擴增。使用 Agilent DNA 7500 檢測方法分析樣本,使用 Expert 2100 軟件分析結果。



          調整片段大小,滿足您的實驗需求

          使用 Twist 文庫制備 EF 試劑盒 2.0,僅需調整片段化時間,即可根據您的具體需求調節 DNA 文庫片段大小。如圖所示是采用不同的片段化時間獲得的 4 個 NGS 文庫的電泳圖。

          NGS 文庫使用 Twist 文庫制備 EF 試劑盒 2.0 和 Twist 通用接頭系統制備而成。在 37°C 下,按照不同的時長對 50 ng 高質量 gDNA 進行片段化處理,再進行 6 個 PCR 循環擴增。使用 Agilent DNA 7500 檢測方法分析樣本,使用 Expert 2100 軟件分析結果。





          優化文庫擴增,盡可能減少測序錯誤

          擴增期間產生錯誤不可避免,但錯誤并非時常出現。升級版 Twist 文庫制備 EF 試劑盒 2.0 包含 Equinox 反應預混液,其中含有高保真的熱啟動酶。與之前推薦和常用的聚合酶相比,Equinox 反應預混液的錯誤率更低,錯誤插入的堿基更少。這意味著它能實現更精準的擴增,從而獲得值得信賴的測序數據。

          采用專有的 NGS 分析方法來檢測大量錯配堿基對中的堿基錯配事件。給出的數值代表所有錯配事件的平均錯誤率。





















































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