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          TIANSeq直接快速DNA文庫構建試劑盒(IIIumina)(NG101)

          品牌:Watchmaker

          貨號:NG101

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          商品描述

          品牌:Watchmaker

          貨號:NG101

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          產品簡介

          TIANSeq DirectFast Library Kit(Illumina) 是專門針對于Illumina 高通量測序平臺所優化的 DNA 文庫構建試劑盒。本試劑盒實現了 DNA 片段化、末端修復和 3’端 dA 尾添加在一管內一步法完成,同時所得產物無需純化,可直接用于 adapter 的連接。另外,本試劑盒配備的 PCR 擴增試劑經過專門的優化,擴增所得 DNA 序列產量高,保真度好、無堿基偏好性。本產品采用一步法的反應流程,省去了多步純化步驟,整個建庫流程僅需 2.5 hr;文庫轉化效率更高,可對微量 DNA 樣本進行高效的文庫構建。


          主要特點和優點

          ■ DNA 片段化過程和 PCR 富集過程無明顯堿基偏好性,測序均一度好。

          ■ 高文庫轉化效率, DNA 樣本起始量可低至 1 ng。

          ■ 一管式酶促反應,操作簡便,省去多步純化步驟,整個建庫流程僅需 2.5 hr。


          應用

          • 適用于 Illumina 高通量測序平臺 DNA 文庫構建



          文庫構建流程

          實驗結果



          靈活的上樣量和片段處理長度

          圖1. 不同反應時間對DNA 片段化效果

          使用“TIANSeq DirectFast DNA Library Prep Kit” 對10 ng 和1000 ng DNA 進行片段化處理。處理不同時長的反應產物經1.8× 磁珠進行純化后用于Angilent 2100 分析。




          片段化酶與機械片段化效果比較

          圖2. 不同文庫制備方案基因組覆蓋的對比結果,三種不同GC 含量細菌基因組DNA 等摩爾混合,100 ng 混合DNA 經不同方案制備文庫測序后比較基因組覆蓋度。結果表明:FEA Module(NG301) 對DNA 的片段化效果與超聲破碎高度一致,均不存在堿基偏好性。

          樣本低至1ng建庫效果比較

          圖3. 不同文庫制備方案基因組覆蓋的對比結果,三種不同GC 含量細菌基因組DNA 等摩爾混合,1 ng 混合DNA 經不同方案制備文庫測序后比較基因組覆蓋度。結果表明:即使低至1 ng 的DNA 上樣量,FEA Module(NG301) 的片段化效果仍然與 超聲破碎方法高度一致,沒有堿基偏好性。


          采用PCR free步驟測序結果比較

          圖4. 不同初始量的基因組DNA 使用PCR 或PCR free 的方式進行文庫構建,最終的基因組覆蓋對比對。結果表明:使用Fragmentation Module (NG301)試劑及一管式操作和高效的文庫構建步驟,無論是否進行PCR 富集,所得到的DNA 文庫在片段覆蓋度分布方面均與機械破碎方法保持高度一致。

          文庫構建效率與得率統計

          圖5. 不同起始量樣本(1、10、25、50、100、500、1000 ng) 進行文庫構建后,使用qPCR 對得到的文庫DNA 進行定量分析結果。線性回歸分析表明在廣泛的上樣量范圍內,文庫得率均呈良好的線性關系。即使在上樣量低至1 ng 的情況下,文庫構建效率也不會降低。

















































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